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5、免疫學診斷
免疫學診斷是傳染病診斷和檢疫中常用的重要方法,包括血清學試驗和變態(tài)反應兩類。
1.血清學試驗:利用抗原和抗體特異性結合的免疫學反應進行診斷?梢杂靡阎乖瓉頊y定被檢動物血清中的特異性抗體,也可以用已知的抗體(免疫血清)來測定被檢材料中的抗原。血清學試驗有中和試驗、凝集試驗(直接凝集試驗、間接凝集試驗、間接血凝試驗、SPA協(xié)同凝集試驗和血細胞凝集抑制試驗)、沉淀試驗(環(huán)狀沉淀試驗、瓊脂擴散沉淀試驗和免疫電泳等)、溶細胞試驗(溶菌試驗、溶血試驗)、補體結合試驗以及免疫熒光試驗、免疫酶技術、放射免疫測定、單克隆抗體和核酸探針等。近年來由于與現(xiàn)代科學技術相結合,血清學試驗在方法上日新月異,發(fā)展很快,其應用也越來越廣,已成為傳染病快速診斷的重要工具。
2.變態(tài)反應:豬患某些慢性傳染病時,可對該病病原體或其產(chǎn)物的再次進入產(chǎn)生強烈反應。能引起變態(tài)反應的物質(病原體、病原體產(chǎn)物或抽提物)稱為變態(tài)原,如結核菌素,將其注入患病動物時,可引起局部或全身反應。
6、分子生物學診斷
分子生物學診斷又稱基因診斷。主要是針對不同病原微生物所具有的特異性核酸序列和結構進行測定。自1976年以來,基因診斷方法取得巨大進展。建立了DNA限制性內切酶圖譜分析,核酸電泳圖譜分析。寡核苷酸指紋圖、核酸探針、聚合酶鏈反應(PCR)、Western雜交以及新近幾年發(fā)展起來的DNA芯片技術等。在傳染病診斷方面,具有代表性的技術主要有三大類:核酸探針、PCR技術和DNA芯片技術。
1.PCR技術:又稱為體外基因擴增技術。PCR技術主要是檢測病原,用于傳染病的早期診斷和傳染源的鑒定。傳染病的病原體主要有真核生物、原核生物和非細胞型生物(病毒、朊病毒等)三大類。每類病原體都有其特異性的核酸。檢測出特異性核酸就能確定致病的微生物,就能確診是哪種傳染病。
2.核酸探針技術:核酸探針又稱為基因探針、核酸分子雜交技術。該方法有三大組成部分:⑴待檢核酸(模板);⑵固相載體(NC硝酸纖維膜或尼龍膜);⑶用同位素、酶、熒光標記的核酸探針。探針診斷應用范圍:⑴可對病毒、細菌、支原體、立克次氏體、寄生蟲、原蟲等致病原都能做出快速準確診斷。⑵在混有大量雜菌或混合感染物中直接檢出主要致病原。包括難以在體外培養(yǎng)的病原。⑶檢出帶菌、帶毒隱性感染的動物。⑷可對病原微生物進行準確分類鑒定。⑸可對動物產(chǎn)品或食品進行衛(wèi)生檢驗。
3.DNA芯片技術:科研人員正在研究該項技術在動物傳染病的診斷上的應用。DNA芯片技術是在核酸雜交、測序的基礎上發(fā)展起來的,與Southern雜交、Northern雜交同出一個原理,即DNA堿基配對和序列互補原理。目前已有篩選檢測HIV病毒蛋白酶基因和反轉錄酶基因突變的DNA芯片商品。金黃色葡萄球菌、白色念球菌DNA芯片也已問世。
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