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鐵皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo是蘭科石斛屬多年生附生草本植物,因其莖節(jié)處呈黑褐色,又名黑節(jié)草,具有益胃生津、滋陰清熱、清咽利嗓,提高人體免疫能力、抗腫瘤、抗衰老等功效,主要分布于云南廣南、邱北、馬關(guān)、文山及怒江與恩梅開江的分水嶺一帶,海拔1600米以下,以及江南各省。多附生在亞熱帶人跡罕至的深山密林陰濕懸崖峭壁處、樹上或長青苔的巖石上。
鐵皮石斛的種子極小、無胚乳,自然條件下需與某些真菌共生才能萌發(fā),很難用實生苗栽培;而傳統(tǒng)的分株、扦插等方式的繁殖率極低,加上人為的過度采挖和破壞生態(tài)環(huán)境,其資源已瀕臨滅絕,因而被國家列為重點保護的藥用植物之一,鐵皮石斛組織培養(yǎng)快速繁殖被國內(nèi)外學(xué)者廣泛關(guān)注。鐵皮石斛的莖段快繁直接取材于幼嫩莖段,具有取材易、速度快、污染率低、繁殖系數(shù)高等優(yōu)點,可在短期內(nèi)為生產(chǎn)提供大量栽培用苗,因而能有效保護這一寶貴資源。
1.外植體的消毒
石斛莖段在無菌操作臺上用75%的酒精進行表面消毒,去掉灰塵,再用0.1%的升汞滅菌5~8分鐘,用無菌水沖洗3次,在此過程中應(yīng)不斷搖晃燒杯,使其充分滅菌。
2.試驗過程
將已經(jīng)滅菌的石斛莖段,在無菌條件下切成至少帶有一個莖節(jié)的莖段,接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出芽,將芽再誘導(dǎo)出原球莖,原球莖再分化,再壯苗,便可將生長健壯的植株移栽。
3.培養(yǎng)基
基本培養(yǎng)基為N6,附加0.75%瓊脂,3%白糖,PH值為5.8,培養(yǎng)基進行常規(guī)高溫高壓滅菌,溫度為121℃,1.1Mpa,15分鐘即可。激素添加如下①誘導(dǎo)莖節(jié)發(fā)芽:N6+BA2.5毫克/升;②誘導(dǎo)芽形成原球莖:N6+BA2.5毫克/升+I-BA 0.5毫克/升;③誘導(dǎo)原球莖分化為植株:N6+BA 1.5毫克/升+NAA 1.2毫克/升+香蕉汁5%;④生根壯苗培養(yǎng):N6+NAA 2.5毫克/升+土豆汁10%。
或基本培養(yǎng)基為MS,附加0.75%瓊脂,3%白糖,pH5.8。(1)芽增殖培養(yǎng)基:MS+NAA 0.1~0.5毫克/升+BA0.5~2.0毫克/升;(2)壯苗培養(yǎng)基:MS無激素培養(yǎng)基;(3)生根培養(yǎng)基:1/2MS+IBA0.1毫克/升。
4.培養(yǎng)條件:
溫度控制在25±1℃,日光燈照射,每天12小時。
5.移栽
移栽時先將已經(jīng)長大的石斛種苗取出,用清水洗去根部的培養(yǎng)基,洗凈為止,動作要輕,避免損傷其根和葉。然后栽種在以礦質(zhì)巖:泥炭土為1∶1的基質(zhì)中。放在遮蔭棚里練苗一周,便可正常管理,保持濕度80%,溫度不可超過35℃,不接受長時間的陽光直射。
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